Shy, reservado e de estatura pequena, o estudante Sena Kobayakawa, da Escola Secundária Deimon, é o alvo perfeito para os bullies. No entanto, devido a correrias que enfrentou ao longo da vida, Sena se tornou ágil e desenvolveu a habilidade de desviar de multidões. Depois que o astuto Youichi Hiruma—capitão do time de futebol americano Deimon Devil Bats—testemunha as rápidas pernas de Sena em movimento, ele coagiu o tímido garoto a se juntar à sua equipe. Como Hiruma quer esconder a identidade de Sena de outros clubes, Sena é forçado a se ocultar sob o capacete com visor de "Eyeshield 21", um misterioso running back que usa o número 21. O lendário Eyeshield 21 supostamente pode correr à velocidade da luz e realizou feitos impressionantes nos Estados Unidos durante seu tempo no Notre Dame College. Acostumado a evitar seus problemas no passado, a especialidade de Sena pode ser exatamente o que ele precisa para se tornar a nova arma secreta dos Deimon Devil Bats. À medida que interage com seus companheiros de equipe, Sena gradualmente ganha mais autoconfiança e forja laços valiosos ao longo do caminho. Além disso, o anime explora temas de superação e amizade, mostrando como Sena, que sempre foi um outsider, se transforma em um jogador essencial, enfrentando não apenas adversários em campo, mas também seus próprios medos e inseguranças.